操作规程
建议在加样前先在 Data Acquisition software 上设计好实验
实验数据收集
1.启动 Octet Data Acquisition Software
桌面上双击Data Acquisition运行操作软件,仪器初始化,1分钟内完成后显示“Ready”状态。
选择Basic Kinetics
点击下一步
2. Plate Definition:
选择样品孔并且定义样品孔
右键更改样品类型,右侧表格中输入样品名称、浓度等信息,分析物必需要有摩尔浓度。
为了校正基线漂移需要包含零浓度
根据设计将样品按序加入样品板
3. Assay Definition:
点击Add添加分析步骤,设置时间和步骤名称
将➔移动至目标步骤,然后在左侧相应的样品位置双击选中样品,添加到Assay steps中, 选择传感器类型
通过Threshold Params控制样品固化信号
3. Sensor Assignment:
传感器类型可右键菜单进行更改。
4. Review Experiment:
通过黑色箭头预览实验步骤,如果需要可返回修改不符合预期的步骤。
5. Run Experiment:
选择结果数据存贮位置(本地电脑)
在仪器开始运行前,确认传感器和样品板是否正确放置。点击GO,开始运行实验。
6. 数据分析
1). Data selection
打开方式①:file→load a folder(数据存贮位置)
打开方式②:通过文件夹路径,找到动力学结果(粉红色),双击load
在loaded的结果中单击打开待分析的结果。
分析传感器选择。
分析步骤,可右键更改实验步骤类型,去掉不需要分析的步骤。例如,association→baseline
2). Processing
step1:data selection中预览原始数据raw data view,在sensor selection进行reference sensor和reference well选择
step2:选择信号扣除方式
step3:Y轴信号归零(通常选择平衡的最后5秒)
step4:选择align to dissociation消除gap
step5:单击process data处理数据。(选中√,数据降噪处理。(结合时间短,结合曲线可能会扭曲)
3). Analysis
1) 选择用于数据分析的步骤,通常结合解离都分析
2) 选择拟合模型
3) 选择local或global拟合,如果是global,通过传感器或颜色进行分组。根据需要选择数据拟合的时间, 单击fit curves拟合数据, 选择export data,导出结果。
7. 关机
从仪器中取出 sensor tray 和 reagent plates。
关闭仪器舱门
退出软件,电脑关机,关闭仪器,清洁台面卫生
注意事项
1. 不要过量固定样品
2. 建议一次实验在3小时内完成
3. 严禁用手触摸装载传感器的接口顶端的任何部位。
4. 任何机械操作都不能太用力(包括装卸样品、插拔样品杆、操作旋钮和按钮等)。
5. 数据拷贝的方式是刻录光盘,严禁使用u盘。
6. 如果发现仪器有异常情况,须立即向仪器负责人汇报。