操作规程
1、开机:大体按照:电脑——激光台(打开要用的激光按钮)——卤素灯——载物台——显微镜——控制器——软件,荧光灯需要就打开,不需要不用打开。
2、拍摄流程:打开软件Nikon confocal,ok进入软件操作界面,点eye port,看目镜聚焦,然后点eye port及Interlock解锁切换到激光光路L100,根据自己实验来设置参数和探测方法,然后点scan,重调Z轴找焦面,对通道进行HV和功率优化,停止scan,点击capture,完成一次拍摄。
3、图像保存:⑴数据保存:File,save as,保存原始数据文件格式.ND2;⑵图片保存:File,Inport/Export,Export ND document,在Export ND document 窗口中Channels,TIF compatibility Options(选择第二个或第三个),保存叠加图像时,在Export ND document 窗口中Channels勾选Insert Overlaps,再点击export。
4、关机:Z轴降到500以下,物镜转到空挡,最后与开机完全相反顺序进行关机。
注意事项
1、放置样品时,确保样品的中心区域在物镜的正上方,且尽量要物镜在两个夹片中心区域,以免转换物镜时,撞坏物镜;
2、原则上所有的光源都非常忌讳频繁开关,会大大缩短其使用寿命。荧光灯、卤素灯:开机后不管是否使用,都最好半小时后再关闭;关机后至少等十五分钟再开机。激光:开机后不管是否使用,都最好一小时后后关闭;关机后至少等一小时再开机。
3、明场卤素灯的功率值不能超过4,否则会导致温度过高烧坏光纤,影响明场成像;
4、60倍和100倍物镜是油镜,滴油时注意只需沾一下,切勿多,滴了油,如果要转物镜,必须先将当前滴了油的物镜用石油醚清洗擦干净才能转换;
5、实验结束或者换样品转换镜头时必须按照以下程序进行操作:首先,取下样品,将物镜Z轴值降到500以下,然后,将载物台的载玻片拨至两端,最后再进行物镜的转换。